沙鼠脑缺血再灌注损伤后细胞间黏附分子1及降钙素基因相关肽变化与阿司匹林的干预效应

背景：近年来由于溶栓治疗的开展，对脑缺血再灌注损伤保护作用及其机制的探讨成为国内外研究的热点。阿司匹林具有较强的抗血小板聚集作用而用于血栓性疾病的防治。 目的：探讨阿司匹林对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用及其对细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达的影响。 设计：随机分组设计、动物实验。 单位：山东大学临床医学院济南市中心医院神经内科。 材料：实验于2001—12／2002—06在泰山医科大学生理实验室完成。选择健康雄性蒙古种沙土鼠63只，随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组及阿司匹林干预组，每组21只。根据脑缺血再灌注时间将每组动物再分为24h，3，7d3个时相点，每个时相点7只。 方法：采用夹闭双侧颈总动脉的方法，制备沙土鼠短暂性全脑缺血再灌注模型。假手术组：显露双侧颈总动脉，不夹闭动脉。缺血再灌注组：显露双侧颈总动脉，动脉夹夹闭，7min后去除动脉夹恢复血流。阿司匹林干预组：术前经胃管灌人肠溶阿司匹林（50mg／kg）。显露双侧颈总动脉，动脉夹夹闭，7min后去除动脉夹恢复血流，动物在处死前，每日仍经胃管给予阿司匹林。分别于术后24h，3，7d断头处死沙土鼠取脑组织，采用免疫组织化学SABC法，检测脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1及降钙素基因相关肽表达水平的变化，以及阿司匹林干预对二者表达的影响。主要观察指标：脑组织中细胞间黏附分子1及降钙素基因相关肽表达。结果：纳入动物63只，均进入结果分析。①细胞间黏附分子1表达的变化：缺血再灌注24h，缺血再灌组动物脑组织细胞间黏附分子1的表达水平开始增加，3d后明显增强，至7d后仍维持在较高水平，与假手术组相比差异有显著性意义f缺血再灌组分别为（3．36&;#177;&;#177;2．26）％，（5．68&;#177;3．13）％，（4．98&;#177;2．10）％，假手术组分别为（1．53&;#177;1．07）％，（1．56&;#177;1。23）％，（1．62&;#177;1．33）％，P〈0．051；而阿司匹林干预组细胞间黏附分子表达水平，在所有时限均明显低于缺血再灌注组，差异有显著性意义[分别为（0．96&;#177;0．83）％，（2．76&;#177;2．10）％，（1．96&;#177;1．09）％，P〈0．05]。②降钙素基因相关肽表达的变化：在脑缺血再灌注后24h，3，7d缺血再灌注组动物降钙素基因相关肽都呈弱阳性表达[分别为（3．12&;#177;2．26）％，（2．68&;#177;2．04）％，（2．57&;#177;1．97）％]；而阿司匹林干预组则呈强阳性表达[分别为（4．98&;#177;2．47）％，（5．97&;#177;2．35）％，（6．04&;#177;2．40）％]。 结论：脑缺血再灌注可诱导细胞间黏附分子1表达上调，并抑制降钙素基因相关肽的表达；阿司匹林通过抑制细胞间黏附分子1表达水平和增强降钙素基因相关肽表达，从而达到较好的脑保护作用：     

阿司匹林对沙土鼠脑缺血-再灌注损伤后细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达的影响

目的 探讨阿司匹林对沙土鼠全前脑缺血-再灌注损伤后的脑保护作用及其对细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达的影响。方法 采用夹闭双侧颈总动脉的方法，制备沙土鼠短暂性全前脑缺血-再灌注模型。63只沙土鼠随机分为假手术组、脑缺血-再灌注组（脑缺血组）和阿司匹林干预组（阿司匹林组）。应用免疫组化SABC法检测脑缺血-再灌注后细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达水平的变化，以及阿司匹林干预对二者表达的影响。结果 （1）细胞间黏附分子表达的变化：脑缺血-再灌注24h，脑缺血组动物脑组织细胞间黏附分子的表达水平开始增加，3d后明显增强，至7d后仍维持在较高水平，与假手术组相比差异有显著性意义（P〈0．05）。而阿司匹林组动物细胞间黏附分子的表达水平在所有观察时限均明显低于脑缺血组，差异有显著性意义（P〈0．05）。（2）降钙素基因相关肽表达的变化：在脑缺血-再灌注后各时限，脑缺血组动物降钙素基因相关肽的表达均呈弱阳性；而阿司匹林组表达则呈强阳性。结论 脑缺血-再灌注可诱导细胞间黏附分子的表达上调，并抑制降钙素基因相关肽的表达。阿司匹林通过抑制细胞间黏附分子的表达水平和增强降钙素基因相关肽表达而获得较好的脑保护作用。     

NT4 TAT 6×His VHLβ结构域肾癌抑制融合肽cDNA克隆的构建

目的构建VHL蛋白(von Hippel Lindau protein, pVHL)β结构域肾癌抑制融合肽cDNA,并将其应用于肾癌的微基因治疗。方法分别设计合成pVHLβ结构域104 123短肽cDNA的正向和反向引物以及编码TAT 6×His cDNA的正、反向引物,使用互为引物模板PCR方法,扩增获得具有NaeI/Eco72I酶识别位点的TAT 6×His cDNA片段和具有Eco72I/BamH I酶识别位点的VHLβ抑制肽cDNA片段,将两个片段分别克隆到pGEM T easy中,使用双脱氧终止法测序,通过DNASIS软件分析同数据库资料一致性和编码的氨基酸序列。用Nae I和BamH I双酶切获取的TAT 6×His VHLβcDNA片段插入到具有NT4信号肽的pBV220载体中,构建了pBV220 NT4 TAT 6×His VHLβ质粒。结果经DNA测序证实,获得了编码TAT 6×His cDNA片段和编码VHLβ抑制肽的cDNA片段,分析证实核酸序列和推导的氨基酸同数据库资料一致。重组质粒pBV220 NT4 TAT 6×His VHLβ酶切图谱证实已将NT4 TAT 6×His VHLβ融合肽cDNA克隆到pBV220原核表达载体中。结论成功扩增了编码TAT膜渗透肽和6×His标签肽以及VHL抑癌基因β结构域肾癌抑制肽的cDNA片段,构建了具有NT4信号肽的TAT 6×His VHLβ融合肽cDNA。     

基质金属蛋白酶在多发性肌炎/皮肌炎免疫发病机制中的作用研究

多发性肌炎(PM)、皮肌炎(DM)是一种自身免疫反应所致的炎症性肌病,其组织病理改变的主要特点为单个核细胞(MNC)浸润,在此过程中,细胞外基质的蛋白分解破坏是关键的一步[1,2],基质金属蛋白酶(MMPs)具重要作用。该研究运用免疫组化方法,探讨MMPs在PM/DM免疫发病机制中的作用。1资料和方法25例骨骼肌标本取自山东大学齐鲁医院神经病理室活检肌肉组织,其中PM组11例,男3例、女8例,年龄28~80岁,平均51·4岁,病程3~36个月;DM组8例,男7例、女1例,年龄6~36岁,平均20·6岁,病程2~24个月;神经源性肌萎缩、肌营养不良及正常肌组织各2例作为对照…     

电刺激对脑梗死大鼠运动功能及骨形成蛋白表达的影响

目的:探讨电刺激对脑梗死大鼠运动功能及骨形成蛋白2、6、7(BMP2,6,7)表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠,制作大脑中动脉闭塞模型,将造模成功的大鼠随机分为对照组、电刺激组各48只,假手术组32只,正常组8只。对照组、电刺激组、于脑梗死后每天接受自然恢复、电刺激治疗6 h、12 h、24 h、3 d、7 d和21 d。并在上述时间点,各组取8只大鼠,进行走平衡木试验观察大鼠偏瘫肢体功能恢复情况,然后断头处死动物取脑,石蜡包埋切片行免疫组织化学染色,检测梗死灶周围皮质及正常大脑皮质BMP2,6,7的表达。结果:第7天、21天时,电刺激组肢体功能恢复较对照组明显(P0.05)。正常组和假手术组BMP-2,6,7表达无统计学差异。对照组、电刺激组BMP-2表达均先下调,电刺激组大鼠BMP-2下调时间早于对照组,21 d恢复至正常水平,对照组、电刺激组BMP-6,7均上调,BMP-7于7 d灰度值上升,至21 d恢复至正常水平,BMP6则一直保持高水平,电刺激组BMP-6,7表达高于对照组。结论:电刺激组偏瘫肢体功能的恢复优于对照组,电刺激下调BMP-2表达,上调BMP-6,7表达。     

颈动脉超声与脑循环动力学检测对高血压病合并缺血性脑卒中的早期诊断

目的：探讨颈动脉超声和脑循环动力学（CVA）检测对高血压病合并缺血性脑卒中的早期临床诊断价值。方法：采用彩色多普勒超声和CVA检测仪检测分析120例高血压病合并缺血性脑卒中超早期和急性期患者的颈动脉内膜中层厚度（IMT）、IMT／D比率及CVA各项指标并与60例健康成人对照。结果：病例组患者颈动脉IMT及IMT／D比率均明显大于对照组；缺血性脑卒中超早期组Vimean,Qmean比急性期组明显降低，而R、DR明显增高，超早期组CVA检测阳性率明显高于急性期组。颈动脉IMT及IMT／D比率与Vmean,Qmean呈直线负相关，与R、Zc呈显著直线正相关。结论：颈动脉超声及CVA检没对高血压病合并急性缺血性脑卒中的早期诊断具有重要临床意义。     

多发性肌炎/皮肌炎免疫发病机制研究进展

多发性肌炎/皮肌炎病因未明,目前多认为与免疫相关。本文从细胞毒性T细胞、TCR基因重排、主要组织相容性复合体、细胞因子、趋化因子和黏附分子、凋亡、自身抗体以及基质金属蛋白酶等不同方面就其免疫发病机制进行综述。     

人硫氧还蛋白cDNA的克隆和表达

我们在本研究中克隆出hTrx成熟区cDNA序列并在原核中高效表达出hTrx蛋白,现将结果报道如下。一、材料和方法14 3 (TK-)人骨肉瘤细胞、pBV2 2 0由西安华广生物工程公司馈赠。pGEM TEasy为Promega公司产品。AMV逆转录酶、Oligo(dT) 15等试剂均购自华美生物工程公司。收集铺满度为80 %的14 3 (TK-)人骨肉瘤细胞2×10 7,异硫氢酸胍一步法提取RNA。根据Genbank提供的已知序列(J0 40 2 6) ,设计下列引物:上游引物5’CGGAATTCATGGT GAAGCAGATCGAGAGC 3’,5’端设有EcoRI酶切位点;下游引物:5’CGGGATCCGATTAGACTAAT…     

急性脑梗死患者高血压与脑循环动力学的关系

高血压动脉粥样硬化病变是引起缺血性脑卒中的重要原因[1]。为探讨急性脑梗死患者高血压对脑循环动力学(CVA)的影响及其两者之间的关系 ,我们检测分析 170例急性脑梗死患者的颈动脉CVA ,结果报告如下。1.对象与方法 :脑梗死急性期患者 170例 ,系济南市中心医院急诊及住院患者 ,男 10 1例 ,女 69例 ,平均年龄60 .68岁± 10 .56岁 ,所有病例均符合全国第四次脑血管病学术会议制定的诊断标准。根据是否合并高血压分为脑梗死组 52例 ,脑梗死合并高血压组 118例 ,其中高血压 1级 3 9例 ,2级 46例 ,3级 3 3例。高血压诊断及分级符合 1999年世界…     

沙鼠脑缺血再灌注损伤后细胞间黏附分子1及降钙素基因相关肽变化与阿司匹林的干预效应

背景:近年来由于溶栓治疗的开展,对脑缺血再灌注损伤保护作用及其机制的探讨成为国内外研究的热点。阿司匹林具有较强的抗血小板聚集作用而用于血栓性疾病的防治。目的:探讨阿司匹林对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用及其对细胞间黏附分子及降钙素基因相关肽表达的影响。设计:随机分组设计、动物实验。单位:山东大学临床医学院济南市中心医院神经内科。材料:实验于2001-12/2002-06在泰山医科大学生理实验室完成。选择健康雄性蒙古种沙土鼠63只,随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组及阿司匹林干预组,每组21只。根据脑缺血再灌注时间将每组动物再分为24h,3,7d3个时相点,每个时相点7只。方法:采用夹闭双侧颈总动脉的方法,制备沙土鼠短暂性全脑缺血再灌注模型。假手术组:显露双侧颈总动脉,不夹闭动脉。缺血再灌注组:显露双侧颈总动脉,动脉夹夹闭,7min后去除动脉夹恢复血流。阿司匹林干预组:术前经胃管灌入肠溶阿司匹林(50mg/kg)。显露双侧颈总动脉,动脉夹夹闭,7min后去除动脉夹恢复血流,动物在处死前,每日仍经胃管给予阿司匹林。分别于术后24h,3,7d断头处死沙土鼠取脑组织,采用免疫组织化学SABC法,检测脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1及降钙素基因相关肽表达水平的变化,以及阿司匹林干预对二者表达的影响。主要观察指标:脑组织中细胞间黏附分子1及降钙素基因相关肽表达。结果:纳入动物63只,均进入结果分析。①细胞间黏附分子1表达的变化:缺血再灌注24h,缺血再灌组动物脑组织细胞间黏附分子1的表达水平开始增加,3d后明显增强,至7d后仍维持在较高水平,与假手术组相比差异有显著性意义[缺血再灌组分别为(3.36±2.26)%,(5.68±3.13)%,(4.98±2.10)%,假手术组分别为(1.53±1.07)%,(1.56±1.23)%,(1.62±1.33)%,P<0.05];而阿司匹林干预组细胞间黏附分子表达水平,在所有时限均明显低于缺血再灌注组,差异有显著性意义[分别为(0.96±0.83)%,(2.76±2.10)%,(1.96±1.09)%,P<0.05]。②降钙素基因相关肽表达的变化:在脑缺血再灌注后24h,3,7d缺血再灌注组动物降钙素基因相关肽都呈弱阳性表达[分别为(3.12±2.26)%,(2.68±2.04)%,(2.57±1.97)%];而阿司匹林干预组则呈强阳性表达[分别为(4.98±2.47)%,(5.97±2.35)%,(6.04±2.40)%]。结论:脑缺血再灌注可诱导细胞间黏附分子1表达上调,并抑制降钙素基因相关肽的表达;阿司匹林通过抑制细胞间黏附分子1表达水平和增强降钙素基因相关肽表达,从而达到较好的脑保护作用。